搞的就是艺术
别人放假我学习
医学生的日常
“💥灵感爆发!提取原代细胞!”
原代细胞提取tips(医学生经验总结篇)
组织提取原代细胞培养protocol:
1️⃣取出组织,放入准备好的带有无菌培养基的EP管内。
2️⃣用含100U/ml青霉素和链霉素的PBS溶液,漂洗2-3次,直到漂洗液清亮透明为止。(不要用枪吹吸组织,泡一会,1min左右或者用镊子夹着摇晃即可)
3️⃣组织块基本上无血块,用剪刀将其剪碎成约1-3mm3大小(偏圆润)的组织块。
4️⃣再次用pbs来回清洗2到3次,直到透明
5️⃣清洗完成后,将其需要的适量组织块转移到新的15ml离心管内
6️⃣加入0.25%的胰蛋白酶或1%的胶原蛋白酶与组织=1:1
7️⃣将其放入37℃恒温水浴箱或者摇床(水浴箱内,我们要不断的摇晃充分)
8️⃣完成后道路过滤塞内留下所要液体,放入其离心机内,1000转五分钟, 完成后去掉其上清液,1-2mL加入含15%胎牛血清的DMEM培养基,使细胞接触到培养基。(组织飘起来没关系,注意静置培养)
9️⃣来回吹打取出一粒鱼,在不片上放于倒置显微镜下观察